Wat houdt 'respons' in bij een HPLC?

Ik neem aan dat je al weet wat een kalibratielijn is, maar voor alle zekerheid geef ik je een uitleg in "plat Nederlands".

1) Je begint met het voorbereiden van een N-aantal gestandarisseerde monsters, en dat betekent monsters met verschillende concentraties waarin je precies weet hoeveel van de stof die je wil bepalen erin zit, doorgaans omdat je deze stof zelf hebt afgewogen en toegevoegd.
Het minumum aantal monsters is 2 (met 2 punten krijg je een lijn), maar liever meer. Hoe meer monsters (oftewel punten), hoe betrouwbaarder je kalibratielijn.

2) Je verricht een aantal metingen (in jou geval met HPLC) met de monsters. Elke keer dat je een monster analyseert met de HPLC, krijg je een signaal van het aparaat als de stof wordt gedetecteerd, die vaak op een scherm als een piek wordt afgebeeld of met een numerieke waarde (vaak een %) De hoogte van deze piek is je respons, en deze respons is meetbaar, gewoon in millimeters (of een andere meeteenheid, dat kan per geval variëren)
Krijg je geen respons (geen piek), dan kan het zijn dat de concentratie van de stof te laag is, of dat je het verkeerde detector gebruikt, of de verkeerde kolom, of de verkeerde oplosmiddel...

3) Als het goed is, heb je straks een N-aantal metingen gedaan, die een N-aantal responsen hebben geproduceerd, die je vervolgens in een grafiek kan afzetten: in de X-as de concentratie van je stof (deze weet je omdat je dit zelf bepaald hebt), en in de Y-as de respons (in mm)
Als je dit doet met een software pakket (b.v. MS-Excel), dan heb je altijd de optie om een regressielijn te traceren. De verhouding tussen concentratie van je stof en respons is meestal lineair, dus je zal zien dat de puntjes netjes op een rechte lijn staan, en deze lijn is je kalibratielijn. Bij een zeer laag, of een heel hoog respons, zal je zien dat de punten niet meer op de lijn staan. Dat komt omdat de respons niet meer lineair is.

4) Met behulp van deze kalibratielijn, kan je vervolgens elk willekeurig monster analyseren, de respons van je HPLC apparaat meten, en deze vervolgens brengen naar je regressielijn, waarmee je heel eenvoudig kan bepalen de daadwerkelijke concentratie van je stof in het monster.

Kortom: "respons" is een meetbaar signaal geproduceerd door de detector van een HPLC (of welk ander detectieapparaat dan ook), maar om een respons te kunnen vertalen naar een concentratie stof, heb je eerst een kalibratielijn nodig.