waarom zitten GSH en GSSG in een refolding buffer bij eiwit zuivering?

Glutathione bestaat in zowel de gereduceerde (GSH) als geoxideerde vorm (GSSG).
In de gereduceerde toestand, kan de thiolgroep van cysteine ​​een reducerend equivalent (H + + e-) doneren aan andere onstabiele moleculen, zoals reactieve zuurstofsoorten (ook wel peroxides). Wanneer Glutathion zelf een elektron doneert, wordt het zelf reactief, en reageeert het gemakkelijk met andere reactieve glutathion om disulfide glutathion (GSSG) te vormen. Een dergelijke reactie is waarschijnlijk te wijten aan de relatief hoge concentratie van glutathion in cellen (tot 5 mM in de lever).

2 GSH + ROOH → GSSG + ROH + H2O

Dit geldt voor peroxides. Peroxides zijn funest voor eiwitten.

In het geval van oxidatoren kan GSH oxideren. Dit is omkeerbaar met NADPH

Wanneer de eiwitten zijn ontvouwen, zijn ze dus erg gevoelig voor elke oxidator die voorbij komt. De GSH zorgt voor dat zowel de gewone oxidanten als de uiterst reacteve peroxides (eigenlijk radicalen) meteen worden weggevangen.

Bottomline, om te zorgen dat de oxidanten weg te vangen, die zeker aanwezig zijn als de cellen gelyseerd zijn en je vanaf daar doorgaat met je eiwitten.

In aanvulling op het vorige antwoord: Essentieel onderdeel van refolding is dat de correcte disulfidebruggen weer worden gevormd. GSH/GSSG helpt daarbij, via de evenwichtsreactie:
GSSG + 2 eiwitSH <> 2GSH + eiwitSSeiwit