Wat is de beste DNA Isolatie Methode bij Wangslijmvlies?

DNA extractie

Tijdens dit project wordt er gebruik gemaakt van de chelex-100 resin methode.

Deze methode houdt in dat de celwand wordt ontbonden.
Chelex 100 is een hars die gebruikt wordt om andere verbindingen te zuiveren via ionenwisseling. Het is opmerkelijk om zijn vermogen om metalen te binden.
De chelex heeft hoge affiniteit met metalen. Het zorgt er voor dat aanwezige metalen niet mengen met het DNA, zodat dit wordt gezuiverd.
Door te centrifugeren kan het DNA worden gescheiden van de chelex, waarna het in een nieuw pipetje wordt overgebracht en kan worden ingevroren tot het moment van gebruik.

Toegevoegd na 3 minuten:
deze methode geeft de minste onzuiverheden

Doel van de proef
Het doel van deze proef was: het isoleren van je eigen DNA uit een stukje wangslijmvlies. ( m.b.v. bepaalde stoffen en methodes )

Werkwijze
Om te beginnen moest je 3 ml water in een reageerbuisje doen. Door gedurende 30 seconde op je wang te kauwen, kwam er een beetje wangslijmvlies los te zitten. Vervolgens moest je de 3 ml water in je mond nemen en weer terug in het reageerbuisje spuwen, zodat het wangslijmvlies mee zou komen. Vervolgens moest je 2 ml lysis-buffer toevoegen aan het reageerbuisje. Dit zorgt ervoor, dat de membranen oplossen , zodat het DNA vrijkomt in de oplossing. Door protease aan de oplossing toe te voegen , wordt het DNA losgemaakt van de eiwitten en komt de DNA nu helemaal vrij in de oplossing. Om deze reactie te laten verlopen, moest de oplossing in een waterbad van precies 50 graden Celsius worden gezet. Om het DNA te laten neerslaan in de oplossing ( het klontert dan samen als een soort grote dradenkluwen ), moest je koude alcohol toevoegen. Door het omdraaien van het buisje en het mengen van de oplossing klontert het DNA nog meer samen en wordt het zichtbaar als ‘draderig spul’. Nu is het DNA geïsoleerd uit het wangslijmvlies en kon je het in een halskettingflesje gieten, zodat je je eigen DNA om je nek kon hangen!

Materialen
- reageerbuisje
- pipet
- wangslijmvlies
- water
- koude alcohol ( 97 % )
- epje protease-oplossing
- epje lysisbuffer
- waterbad ( 50 graden Celsius )
- halskettingflesje